徠卡熒光顯微鏡的工作原理
徠卡熒光顯微鏡的工作目標(biāo)是對(duì)樣品得到一個(gè)放大像，使原來(lái)肉眼看不見(jiàn)的細(xì)節(jié)能變得清晰可見(jiàn)。這里有兩個(gè)基本的性能指標(biāo)：一是分辨率極限，二是zui高有效放大倍數(shù)。分辨率是分辨物體細(xì)節(jié)的zui小極限。儀器可分辨的zui小細(xì)節(jié)經(jīng)適當(dāng)放大后，變成人眼所能看清者。顯然，如果超越了儀器分辨率的能力，即使進(jìn)一步提高放大倍數(shù)，也不能讓人清晰看到更小的細(xì)節(jié)。這種現(xiàn)象必須借助于光的波動(dòng)學(xué)說(shuō)來(lái)解釋。
徠卡熒光顯微鏡中所用的可見(jiàn)光源是波長(zhǎng)為400一800nm的電磁波。波傳播的特性之一是衍射。衍射就是波遇到障礙物時(shí)能偏離直線(xiàn)傳播的性質(zhì)。根據(jù)基礎(chǔ)物理知識(shí)可知，由于實(shí)際光學(xué)儀器都有限制光束的“窗口”（光學(xué)顯微鏡中的“窗口”就是物鏡邊緣所限制的透光范圍），它造成的衍射效應(yīng)會(huì)使每個(gè)物點(diǎn)形成的像都是有所擴(kuò)展的衍射光斑?？康锰南顸c(diǎn)彼此重登起來(lái)，會(huì)使畫(huà)面中的細(xì)節(jié)變得模糊不清。其它光學(xué)顯微鏡中還有一些像差（如球差和色差等）也會(huì)使像點(diǎn)展寬，但它們大多可以校矯正。所以衍射差就成了限制光學(xué)顯微鏡分辨率的*重要因素。
根據(jù)Huy8en分FmsMl原理可以得出：一個(gè)物點(diǎn)所形成的衍射像斑是一種強(qiáng)度大部分（約84％）集中在中心圓斑，而周?chē)橛袕?qiáng)度逐漸減弱的若干離散同心環(huán)的衍射花樣。中心圓斑（也稱(chēng)Airy圓斑）的半徑r約為：
r≈0.16λ/sinθ
式中：λ—顯微鏡像方所用介質(zhì)中的光波長(zhǎng)
θ —物鏡光闌（即物鏡“窗口”）對(duì)像點(diǎn)所張的半角．亦稱(chēng)像方物鏡孔徑角或電子束半張角。光學(xué)儀器中通常采用Rayl出gh判據(jù)作為分辨率的標(biāo)準(zhǔn)，即當(dāng)一個(gè)囚斑像約中心剛好落在另一相鄰圓斑像的邊緣上時(shí)，這兩個(gè)俄恰好能被分辨。因此圖像上可分辨的zui小距離眾就是Airy圓斑的半徑r。
通常被稱(chēng)為顯微鏡的數(shù)值孔徑（numericalaperture）。由式得知，因可見(jiàn)光的波長(zhǎng)局限在400nm到800nm之間，故若要縮小可分辨距離久，就必須增大數(shù)值孔徑。但是為此只能靠提高的值，具體做法可以是在載物片與物鏡之間加油滴等。
